产品升级 | 蛋白组学 DIA技术&糖基化修饰分析软件

DIA定量质谱技术：数据非依赖性采集 (Data independent acquisition，DIA) 是一种能够显著提升蛋白质组学研究通量和可重复性的强大技术，已广泛运用在各种生物学样品检测中。经典的 DIA 流程通常依赖于 DDA谱图库的构建，需要将样品离线分级成多个组分分别上机检测，消耗大量的机时、样品，周期长，成本高。

近年来，越来越多的不依赖于 DDA 建库的分析方法相继诞生，例如 DIA­Umpire ,  PECAN(YingS Ting 2017) , encyclopeDIA (Brian C. Searle 2018) 等。encyclopeDIA 系列技术采用气态在线分离(gas­phase fractionation , GPF) 技术，在采集 DIA 数据的同时，通过额外的 6 针分段采集 DIA 数据，结合 PECAN 算法或 Prosit(Siegfried Gessulat and Wilhelm 2019) SVM 模型构建色谱库 (Brian C.Searle 2020) ，用于实际样品的 DIA 数据分析。

注：气相分馏（GPF），定义为在多个较小的质荷（m/z）范围内对样品进行反复质谱检测，与液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）分析中从宽质谱扫描中选择的离子相比，可从更多的独特肽中选择碰撞诱导解离离子。

GPF-DIA建库技术特点：

1. 最优的母离子扫描范围：400~1000m/z；

2. 1例pool样本6次上机建库，达到甚至超过DDA所需的几十个组分的建库结果，极大的减少了建库所需要的样本量以及质谱上机成本；

3. 4m/z窗口经算法重构为2m/z，获取逼近PRM的高质量数据。

    

蛋白质糖基化(Glycosylation)是一种常见的蛋白翻译后修饰，影响蛋白质的空间构象、生物活性、运输和定位，在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。糖蛋白根据其糖链结构及糖基化位点主要有N-糖蛋白与O-糖蛋白两大类。N-糖基化（N-linked glycosylation）是糖链通过与蛋白质的天冬酰胺的自由-NH2基共价连接形成的，O-糖基化(O-linked glycosylation)是糖链与蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的自由OH基共价连接, O-糖基化位点没有保守序列，糖链也没有固定的核心结构，组成既可是一个单糖，也可以是巨大的磺酸化多糖，因此与N-糖基化相比，O-糖基化分析会更加复杂。

       糖蛋白质组学即利用组学的手段，从全局上去寻找发生糖基化修饰的位点，探索糖蛋白在生命活动中扮演的角色和生物学功能。在糖蛋白组研究中，由于糖修饰蛋白只占全蛋白组中的一部分，因此，针对糖蛋白组的研究，通常需要进行糖肽富集后再进行上机检测。目前常用的糖蛋白分离富集技术有以下五种：凝集素亲和技术、肼化学富集法、硼-酸法、免疫法, 亲水相互作用色谱法（HILIC）。由于糖链的复杂性，采用一款合适的鉴定软件，解析糖链结构，鉴定完整糖肽，对于糖蛋白组学研究显得尤为重要。

糖基化蛋白组学特点：

高级搜库：N-糖搜库软件GPSeeker ：在提供常规的肽段、糖基化位点，组成信息的同时，可提供具体的糖型结构；

高通量搜库：O-糖搜库软件O-bracket：一次性可添加数十种修饰类型，直接证据（基于结构决定性碎片离子的鉴定和定量）实现精准的位点解析和组成，通量更高，搜索效率更高；

超长检测：70厘米长的分析柱(360μm外径× 75μm内径)，总时长达4h；有效提高样本的分离效果；

准确检测：每例样本3次技术重复上机，有效增加糖链鉴定覆盖度以及准确度；

高分辨质谱：Orbitrap Exploris™ 480，在m/z 200下分辨率可达480,000。

Biotree拥有过硬的质谱检测技术和专业的服务平台。从2012年到2020年，一直致力于质谱研究。在蛋白质谱技术服务上积累了大量的项目经验，我们致力于打造优秀的技术服务团队。在您的科研工作中，有需要做蛋白质谱检测，欢迎垂询。咨询方式：

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